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ATP检测方法

作者:迪信泰检测科技(北京)有限公司 2020-09-09T14:52 (访问量:3323)

1. 电泳法:根据核苷酸分子同时携带酸碱基团,在一定条件下,利用其在电场中的迁移速度不同而实现分离。

1) 纸电泳法: 将电场加在浸泡过缓冲液的滤纸上,使ATP与其他杂质分离,再利用比色法测定ATP的吸收值,计算其含量。此法是卫生部及地方采用的ATP标准检测方法。

2) 凝胶电泳法:根据介质不同,可分为聚丙烯酰胺电泳法(PAGE),SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳法,前两种方法常用于生物机制的研究。琼脂糖凝胶电泳法是以琼脂糖为介质,柠檬酸为缓冲液,利用电泳将ATP与杂质分离,实现ATP含量检测。

3) 毛细管电泳法:以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用各组分间淌度和分配行为上的差异,实现ATP与杂质的分离。

2. 光学分析法:因其操作简单、仪器要求低,常用于科研领域的ATP含量分析。

1) 分光光度法:采用ATP试剂盒,因ATP腺嘌呤碱基上存在共轭双键,在紫外下有吸收峰,可用紫外分光光度法检测ATP含量。

2) 生物发光法:利用荧光素在荧光素酶的作用下,与ATP发生反应,生成荧光素-ATP复合体,该复合体被分子氧氧化后激发荧光素发光,根据发光强弱可检测ATP含量。

3. 层析法:利用样品各组分之间亲和力、分配系数等化学性质的差异,实现ATP与其它杂质的分离。

1) 纸层析法:是检测核苷酸含量的常用方法之一。该方法常以异丙醇、浓氨水和水按7:1:2的混合作为展开剂。

2) 薄层层析法:该方法纸层析法原理基本相同,也是检测核苷酸含量的常用方法之一,其常用的展开剂是正丁醇、丙酮、冰乙酸、氨水、水按7:5:3:3:2的比例混合而成。

3) 离子交换色谱法:利用样品各组分离子交换能力或选择系数之间的差异,实现分离,常用于工业生产中ATP含量检测。

4) 高效液相色谱法:此方法具有强大的分离能力,操作简单,分析时间短,灵敏度高,结果准确,是目前应用最广泛的一种ATP检测方法。迪信泰检测平台依托HPLC和LC-MS技术,提供专业的ATP检测服务,价格合理,欢迎咨询。

注:此为高效液相色谱法(HPLC)检测ATP、ADP、AMP的标准品色谱图

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