动物模型的前序检测--中和抗体检测

中和抗体（nAb）可以通过多种机制介导抗病毒功能，包括中和作用和抗体效应功能，可用于指导病毒疫苗设计，或作为抗病毒药物用于预防和治疗病毒性疾病中。中和抗体检测可快速检测样本（24h即可出结果），并适用于高通量的检测方式，可快速了解候选化合物的有效性。单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV，图1）是疱疹病毒的典型代表，由于感染急性期发生水疱性皮炎即单纯疱疹而得名。一般认为HSV病毒通过附着（attachment）和融合（fusion）两个步骤完成入侵细胞，这一过程涉及多种宿主细胞表面受体和病毒包膜蛋白相互作用。

图1. HSV病毒结构示意图

 迪福润丝生物自有的CRO服务平台「DIFF+」可针对HSV疫苗及药物进行评价，提供基于细胞病变效应法（Cytopathic Effect, CPE）的HSV中和抗体检测服务（图2）。

图2. HSV中和抗体检测流程图

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单纯疱疹疫苗动物模型

一般而言，通过中和抗体检测筛选出中和效果理想的候选物后，可以利用动物模型进行进一步的评价，利用合适的实验动物来评估急性或持续性感染的情况。研究HSV的常用模型有近交小鼠模型、大鼠模型和豚鼠模型，小鼠模型的主要优点是可利用多种试剂来研究免疫和分子生物学反应；生殖器棉鼠模型服用甲羟孕酮后四天，可在阴道中感染HSV-1和HSV-2，目前该模型正用于评估临床试验中使用的gD疫苗；备受关注的还有HSV-2生殖器豚鼠模型，主要优点是受感染的动物会发展出易于量化的急性自限性疾病，有很容易发现的自发性复发。

具体来说，使用豚鼠模型来进行HSV疫苗评价时，研究人员通常关注以下几方面：

1. 急性期感染的症状：豚鼠在感染HSV后会表现出类似于人类的局部皮肤或黏膜损伤，这可以帮助评估疫苗对初次感染的预防效果。

2. 复发性病变：HSV在人体中可以进入潜伏期，并在特定条件下复发。豚鼠模型也会出现类似的复发现象，通过研究复发频率和严重程度，可以评估疫苗对抑制病毒复发的作用。

3. 免疫反应：豚鼠模型能够产生人类相似的体液免疫和细胞免疫反应，这有助于评估疫苗诱导的免疫保护机制。

4. 病毒载量和排毒：研究人员可以通过检测豚鼠体内的病毒载量和病毒从黏膜中的排毒量，来评估疫苗对病毒复制的抑制作用。

HSV豚鼠模型是当前有效的研究工具，用于测试HSV疫苗的保护效果和免疫机制，并帮助研究人员改进疫苗设计。

HSV-2豚鼠模型服务

迪福润丝生物采用豚鼠进行HSV-2动物攻毒可产生明显的体重变化（图3）与病变（图4），根据实际症状，设置了相应的评分标准，具体的案例模型评分如下（图5）：

· 1分：生殖器红肿并产生疱疹，

· 2分：多个疱疹融合成片，

· 3分：疱疹溃烂流脓，

· 4分：疱疹溃烂流脓发黑+大小便失禁，

· 5分：疱疹溃烂流脓发黑+大小便失禁+四肢无力或瘫痪，

图3. HSV-2豚鼠攻毒体重变化（不同剂量攻毒）

图4. HSV-2豚鼠攻毒实际症状变化

图5. HSV-2豚鼠攻毒模型案例评分

HSV-2豚鼠攻毒毒株信息