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T4 DNA Ligase T4噬菌体DNA连接酶的主要用途是连接 带匹配粘端的DNA分子，或使平端的双链DNA分子互相连接或与合成接头相连接。也可催化DNA与RNA之间以及少的 RNA之间的连接，但不能催化单链DNA之间的连接。

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该酶催化契合双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。需ATP做辅酶。不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。

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