骆驼组织白细胞分离液试剂盒
产品名称: 骆驼组织白细胞分离液试剂盒
英文名称: Camel tissue leucocyte separator kit
产品编号: P1880
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷492A
品牌商标: solarbio
更新时间: 2024-12-05T09:48:33
使用范围: null
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骆驼组织白细胞分离液试剂盒
操作步骤:
1. 制备脏器组织的单细胞悬液。
2. 在离心管中加入适量分离液(细胞悬液体积小于5mL时,加入5mL分离液;大于等于5mL,加入等体积分离液。但二者的总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果),将细胞悬液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取细胞悬液,然后将细胞悬液小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。如果样品较多,加样的时间较长,在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。)
3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(细胞悬液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,最佳的分离条件需摸索,离心转速最大不超过1200g)。
4. 离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的稀释液层;稀释液与分离液之间是淋巴细胞层;分离液中为粒细胞层(个体差异或者是分离条件不同,粒细胞层可能分离不明显);最下层为红细胞层。
5. 小心的吸取淋巴细胞层及分离液层细胞到15mL洁净的离心管中,10mLPBS或细胞洗涤液洗涤细胞。250g,离心10min(如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液)
6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。
7. 重复步骤6
8. 弃上清,细胞重悬备用。
脏器组织单细胞悬液的制备方法
脏器组织研磨的方法:
1. 无菌条件下摘取脏器组织,撕去被膜,用眼科剪将脏器组织剪成小块。
2. 将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上,加入少量全血及组织稀释液(保证脏器组织及获得的细胞处于液体环境中)。
3. 将脏器组织放置于筛网上,使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脏器组织(尽量控制研磨力度,保持筛网悬空,避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡)
4. 研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网,收集细胞悬液,再经滤网过滤。
分离示意图
注:
A. 可用酶消化法,使用胶原酶对脏器组织组织进行消化,得到单细胞悬液。
B. 如果最终得到的细胞需要培养,那全过程所需试剂与器材均要求无菌。
C. 根据脏器组织的体积控制单细胞悬液的浓度在108~109个/mL。
注意事项:
A. 开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。。
B. 分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C. 稀释血液或洗涤细胞,不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液,其成分会导致细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。
D. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。
E. 样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。
F. 如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在收集血液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。
G. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同,用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
参考文献
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