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重组蛋白昆虫表达服务

作者:卡梅德生物科技(天津)有限公司 2018-09-18T00:00 (访问量:3541)

卡梅德生物多年致力于重组蛋白表达,抗体制备研究,我们目前拥有大量的商业化表达载体质粒包括多种标签质粒(His,GST,SUMO,FLAG等标签)以及多种表达宿主细胞可选,以满足每个客户不同的重组蛋白制备要求
重组蛋白表达服务 — 昆虫杆状病毒表达系统

昆虫杆状病毒表达系统属于真核表达系统之一,具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性高等特点,重组表达的蛋白产品具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。同时昆虫细胞悬浮培养模式有利于大规模表达重组蛋白,可达到10,000L级别。卡梅德生物可以为客户提供整套的蛋白表达方案,我们免费对客户提供的基因进行序列分析测试,同时根据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。我们的团队成员具有多年的重组蛋白和抗体的制备经验,使得我们熟悉不同蛋白的表达特性,如膜蛋白表达,内源性蛋白表达以及分泌性蛋白表达,同时公司拥有的GMP/GLP 生产级实验室和严谨的符合临床注册原则的文件记录体系,能为您的蛋白产品保驾护航。

我们可供给您的昆虫宿主细胞系:

细胞

来源

用途

Sf9

Sf9细胞系分离自IPLBSF21-AE

适于转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白

Sf21

Sf21细胞衍生于IPLBSF-21细胞系

转染、纯化、生产高滴度病毒、铺板以及表达重组蛋白。Sf21细胞在一些结构表达方面优于Sf9细胞。

Hi5

Hi5细胞系源于白菜尺蠖卵巢细胞,粉纹夜蛾细胞

适用于重组病毒颗粒表达,也常用于转染和空斑纯化,且Hi5细胞系更适合来表达分泌型重组蛋白

S2

S2 是一种果蝇晚期胚胎细胞。其中多为雌性四倍体细胞,也有双倍体细胞

比较适合病毒结构蛋白等重组表达

主要服务步骤:

客户可提供具体的服务要求,或者由卡梅德生物全权制备重组蛋白

步骤

服务内容

时间

亚克隆

*密码子优化,基因合成(无基因表达);客户提供质粒:扩增并抽提含有目标基因的载体质粒

*拼接序列验证:测序

*交付:正确构建的重组表达质粒及测序原始报告

2

病毒扩大化培养

*重组bacmid DNA扩大化培养,并转染昆虫细胞制备P1P2病毒stock

* P2病毒滴度测定(滴度108109),并验证小量蛋白表达

*P3病毒制备(可选,最多可制备3L重组杆状病毒)

交付:5-10 ml, >107 pfu/ml 病毒及实验报告

34

表达优化及测试

*P3病毒贮液转染昆虫细胞

不同的昆虫细胞系

不同的表达时间

不同的感染复数(MOI

*SDS-PAGEWB分析

交付:图片,实验报告

1-2

大规模重组蛋白表达及纯化

* 1L (默认)5L10L30L80L130L250L任选

通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

*SDS-PAGEWB验证蛋白表达

交付:重组蛋白1~5mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上。

12


我们的服务优势:

*密码子优化:包含稀有密码子分析,蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析

*多种融合标签载体和宿主,以保证高可溶蛋白表达和高蛋白活性

*多种规模蛋白发酵模式:小规模(500ml2.5L10L30L)、大规模(80L,130L,250L500L发酵罐)

*短时间内制备高纯度毫克级,克级重组蛋白

*低内毒素:LAL检测法<0.1EU/ug

*完整的GMP文件支撑体系,保证所有材料、试剂和制备信息可追溯

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