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小鼠涎腺细胞原代培养方法

作者:江阴齐氏生物科技有限公司 2014-08-29T16:52 (访问量:2564)

 

1.组织源:6-8周龄C57小鼠
2.性别:雌雄不限
3.培养用液:
基础培养基:M199;
添加因子:FBS; Penicillin; Streptomycin; EGF
4.消化用液
成分:Collagenase-Ⅱ, 透明质酸酶
时间:20min
温度:37℃
5.培养基本操作方法
a.常规麻醉消毒,无菌解剖,取颌下腺,PBS液冲洗去血液;
b.无菌PBS清洗3次,用含双抗的无菌PBS清洗2次;
c.将漂洗后的组织至于平皿中,剥去包膜,剪碎后转移至5ml离心管;
d.加入消化液,置于37℃恒温培养箱中消化60min;
e.终止消化后,过200目筛网,1000rpm离心8min,弃上清液,加无菌PBS清洗并离心两次;
f.弃上清,往沉淀中加5ml完全培养基,重悬细胞后接种至T25方瓶,37℃、5% CO2培养箱中培养观察。
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