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精品│翌圣ZymeEditor打造超高文库转化率T4 DNA Ligase

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2023-06-20T12:33 (访问量:7388)

精品│翌圣ZymeEditor打造超高文库转化率T4 DNA Ligase

建库作为NGS测序的核心步骤,直接影响测序质量,文库转化率是评估文库质量的重要指标,高的文库转化率一定程度上意味着文库丰富度、测序数据均一性更好。常规T4 DNA Ligase催化DNA的 3’-OH 和接头的5’-磷酸基团之间形成磷酸二酯键完成接头连接,但此过程中会出现片段自连,从而减低文库转化率,影响文库丰富度与测序质量。翌圣ZymeEditor™酶改造平台对T4 DNA Ligase进行定向改造获得Hieff® 5' App T4 DNA Ligase(Cat#14960ES),该突变体只能以预苷化接头为底物进行接头连接,显著减少片段自连,提高文库转化率。

1. NGS常规建库流程

产品特点

1、极低片段自连只能以预腺苷化的接头为底物,极大降低片段自连。

2、超高接头连接效率连接效率达95%以上。

3、严格质控无切口酶、外切酶及RNase残留。

数据展示

1、连接效率达95%以上
以100ng 170bp和300bp的模式片段为底物,使用Hieff® 5' App T4 DNA ligase对合成的预腺苷化(App)接头进行接头连接,结果显示连接效率达95%以上,且片段自连占比极低。

图2. 以170 bp模式片段为底物连接效率检测

3. 以300 bp模式片段为底物连接效率检测

2、无RNase 残留
将2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物RNA孵育,琼脂糖凝胶电泳比较RNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无RNase残留。

4. RNase残留检测 C:阴性对照

3、无切口酶及外切酶残留

将200 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物DNA孵育,琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无切口酶残留。

5. 切口酶残留检测 C:阴性对照

将2000 U Hieff® 5' App T4 DNA ligase与底物DNA孵育,琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣Hieff® 5' App T4 DNA ligase无外切酶残留。

6. 外切酶残留检测 C:阴性对照

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产品定位

产品名称

产品货号

末修加A

UCF.ME® T4 DNA Polymerase (3 U/μL)

14457ES

T4 Polynucleotide kinase(10 U/μL)

12902ES

常规接头连接

Hieff® Quick T4 DNA Ligase

10301ES

预腺苷化接头连接

Hieff® 5' App T4 DNA ligase

14960ES

文库扩增

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