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细胞铺板不均匀?3招铺遍天下板子无敌手!

作者:无锡耐思生命科技股份有限公司 2023-08-15T00:00 (访问量:11142)

                                                             细胞铺板不均匀?3招铺遍天下板子无敌手!



为什么把细胞铺均匀就那么的难?什么米字法、十字法、螺旋法、还有摇板子要拿起来摇、 或者一定要放在台子上磨(那种板子与台子摩擦出来尖锐的声音...... 最后放进孵箱之前,还生怕几步路摇坏了才铺好的板子........)五花八门.

不过大多数技巧其实并没有太大的用处,本文总结最实用的细胞铺板的3种手法技巧,有了这些手法,细胞铺均匀不是事儿!

首先,细胞铺板不均匀分为三种情况:


1.中间多,周围少


2.中间少,四周多


3.一坨一坨成块


到底该怎么拯救呢?


手法一:均匀单层

要铺成那种很均匀的单层细胞,手法如下:

1.细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基,放入孵箱中放置10-20min。

2.在滴入细胞时,细胞板子与通风橱有一定的角度,沿着板壁的孔边缘滴入。

3.滴入后,呈“8”字方法摇晃5-8次。

4.置于水平台上,放置10-20分钟

5.放入孵箱。

在细胞铺板时,每一种板子的孔面积有多大,培养的液体量以及加入细胞量参考下图.


手法二:中间少,周围多

其实细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀,比如,做免疫荧光时可以铺中间少,周围稍多的板子,同时检测到单个细胞的形态,另外又可以照一点低倍的用作于统计,所有的细胞都在一个环境中。

特别说明一下:这里的多也只是相对于多,细胞也是单层的。

中间

四周


要铺这样的细胞样子,那铺细胞时要注意手法了:

1.细胞板子不需要提前用培养基润洗,直接从边上滴入混有细胞的培养基。

2.放置30s-1min后,前后摇晃5-8次。

3.放在水平台上静置2-5min。

4.放入孵箱。


手法三:中间多,周围少

一般在提取蛋白或者提取RNA的时候有时会这样铺板,因为有些细胞刮刀不好用,没有办法刮到周围的,想要铺中间多,周围少的板子,手法如下:

1.细胞板子不需要提前润洗,从中间滴入进去后。

2.把板子朝一个方向顺时针或者逆时针旋转3-5圈。

3.水平台上静置2-5min。

4.放入孵箱。

想要细胞铺板铺得好,背景知识很重要。在铺细胞的时候,需要准确的知道所养细胞的特性,比如:

1.细胞的名称,来源。

2.细胞的属性。

3.细胞分裂时间。

最主要的是要搞清楚细胞的生长曲线,推断铺板后多久可以到达什么细胞密度。

细胞铺板后,细胞状态不好怎么办?


建议从以下几个方面考虑一下原因:

1.用来铺板的细胞状态本身就不好。

2.用来铺板的细胞传代次数太多,有些老化。

3.胰酶消化时间过长。

4.中和的血清量及时间不够。

5.支原体污染。

细胞铺板是一个经验积累的过程,手法也需要积极的改进,不要生搬硬套,也不要一味追求绝对的铺均匀,在实验过程中多思考细胞本身的特征和属性,出现问题积极解决。

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