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蛋白测序服务

作者:卡梅德生物科技(天津)有限公司 2018-09-18T00:00 (访问量:3512)

基于超高分辨率质谱和高保真基因克隆技术,卡梅德生物能够为客户提供高保真的抗体和蛋白测序服务。

重组蛋白表达服务 — 蛋白De Novo测序服务

卡梅德生物建立了先进的Orbitrap Fusion Lumos质谱仪与数据库结合法测序服务,为广大客户提供极为强大和精准的蛋白质全序列测序服务。鉴于不同的实验需求,我司也为广大科研人员提供Edman降解法测定蛋白N端多达60个氨基酸序列长度。

基于Edman降解法的蛋白N-端测序

Edman法测定单个氨基酸循环包括3步:第一步是在碱性条件下,PITC与蛋白N端的游离氨基结合;第二步是在酸性溶液中,N端残基被切除;第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基,经过在线的HPLC分析,根据洗脱时间最终确定氨基酸种类。

测序步骤:蛋白样品首先进行SDS-PAGE的分离,保证样品的纯度满足测序的要求;随后将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上;经过染色确定把蛋白条带并切出;Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。

项目服务特征:

*蛋白表达及pulldown产物的鉴定:重组蛋白氨基酸顺序验证以及各种免疫沉淀蛋白产物的验证

*细胞株表达产物的验证:验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物N端甲硫氨酸和信号肽是否正确处理

*抗体药物N端序列验证

基于Orbitrap Fusion Lumos质谱仪与Edman降解互补的全蛋白从头测序

客户将蛋白产品寄送至卡梅德生物后,我们会先对蛋白样品进行鉴定和片段化处理,我们会谨慎选用常用6种蛋白酶包括TrypsinChymotrypsinAsp-NGlu-CLys-CLys-,以尽可能得到最多的片段化序列,实现100%蛋白覆盖。多肽质谱测序后的序列信息经过PEAKs StudioPEAKs Ab 软件拼接,并加以人工辅助拼接实现接近100%正确的蛋白或抗体一级序列。更多信息关于完全从头氨基酸序列测序,请查阅抗体从头测序服务

我们的服务优势:

---极为优秀的抗体测序服务保证

我们的测序服务执行严格的质量控制,采用宽进窄出的原则,在不遗漏任何有效数据信息的同时实现了蛋白序列的准确鉴定。目前我们实验室使用的Orbitrap Fusion Lumos质谱仪,相比于上一代Orbitrap Elite质谱仪,Lumos在提高了一级二级质谱扫描速度的同时保证肽段分子量的准确性。同时结合我们行业标杆性逻辑算法和强大的处理能力(基于PEAKS软件分析),我们能够区分分子量接近的氨基酸,如实现分子量差异在0.03Da的谷氨酰胺和赖氨酸差别分析。

---抗体测序服务保证100% 序列覆盖

卡梅德生物针对不同的项目需求,会采用多达6种不同的蛋白酶对目标蛋白进行消化酶切,对单个氨基酸生成至少10次的片段,利用PEAKs StudioPEAKs Ab软件自动实现不同轻重链酶切肽段之间100%全序列拼接;同时利用人工和数据库进行双重验证。

---强大的修饰分析能力

我们的抗体测序平台能够高效地区分同源氨基酸的不同变异体,通过二级碎裂片段的特征峰即可实现亮氨酸和异亮氨酸的准确判定。对于转录后修饰的氨基酸分子,我们的系统也能高效区分。


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